Il campionato di Serie A2 2000-2001 è stato la 3ª edizione della categoria. La stagione regolare si è svolta tra il 14 ottobre 2000 e il 14 aprile 2001, prolungandosi fino al 19 maggio con la disputa delle partite di spareggio. In seguito al ripescaggio in Serie A del Reggio C5 e alla rinuncia dell'Ascoli sono state ripescate le retrocesse Delfino Cagliari e IGP Pisa, mentre il Vesuvio Napoli ha ceduto il proprio titolo sportivo all'Aversa. Le regioni più rappresentate in questa edizione sono Campania, Lazio, Lombardia e Sicilia con tre formazioni ciascuna. Abruzzo, Marche, Toscana e Valle d'Aosta sono presenti con due società a testa, mentre Friuli-Venezia Giulia, Sardegna, Umbria e Veneto una sola. In questa edizione si disputano ben tre derby cittadini: Milano (tra Milano C5 e Toniolo Milano), Pisa (tra IGP Calcetto e San Paolo) e soprattutto Palermo dove va in scena il triplice confronto tra Atletico Palermo, Pianeta Verde e Palermo Futsal.
Aversa, Pomezia e, dopo i play-out, Avezzano retrocessi in serie B 2001-02.
Play-off
Formula
Si qualificano al turno successivo le squadre che, al termine delle due gare, avranno ottenuto il maggior punteggio o, a parità di punteggio, quelle che avranno realizzato il maggior numero di reti. In caso di ulteriore parità saranno disputati due tempi supplementari da 5' ciascuno, al termine dei quali, se perdurasse ancora la parità, sarà ritenuta vincente la squadra con la migliore posizione in classifica al termine della regular season. Le vincenti dei Play-Off si scontreranno con l'undicesima e la dodicesima classificata in Serie A per disputarsi la partecipazione al massimo campionato nazionale.