A Liga dos Campeões da UEFA de 2000–01 foi a 46ª edição do principal torneio de clubes de futebol da Europa, e a nona edição desde que foi renomeado para Liga dos Campeões da UEFA.
Os dezesseis vencedores da terceira fase de qualificação, os dez campeões dos países nas colocações 1-10 do coeficiente da UEFA, e os seis vice-colocados dos países nas colocações 1-6 foram divididos em oito grupos de quatro equipes. Os dois primeiros de cada grupo avançaram para segunda fase de grupos, e os terceiros colocados de cada grupo avançaram para terceira fase da Taça UEFA.
Os oito vencedores e os oito vice-colocados da primeira fase de grupos foram divididos em quatro grupos de quatro equipes, contendo dois vencedores e dois vice-colocados. Equipes do mesmo país ou do mesmo grupo da fase anterior não poderiam está no mesmo grupo. Os dois primeiros de cada grupo avançaram para as quartas de final.
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