PiРНК

piРНК (англ. piwi-interacting RNA, piRNA, piwiRNA, в некоторых источниках встречается как пиРНК[1]) — наиболее крупный класс малых некодирующих РНК, экспрессируемых в клетках животных[2]; они обнаружены в комплексах с белками семейства Piwi, за что и получили своё название. piРНК обычно длиннее микроРНК и малых интерферирующих РНК и имеют длину 26—32 нуклеотида[3], кроме того, в отличие от микроРНК, они не так консервативны[2]. Белки Piwi относятся к большой группе белков Argonaute и экспрессируются почти исключительно в клетках зародышевой линии; они необходимы для поддержания стволовых клеток зародышевой линии, сперматогенеза и репрессии мобильных элементов. Комплексы Piwi с piРНК не только задействованы в сайленсинге ретротранспозонов и других генетических элементов на пост-транскрипционном уровне, но имеют и некоторые другие, в значительной мере ещё неописанные эффекты, например, эпигенетические[4].

Остаётся не вполне ясным, как образуются piРНК, однако были предложены потенциальные методы исследования для этого вопроса, и установлено, что некоторые пути их образования отличаются от такового у микроРНК и малых интерферирующих РНК. В то же время некоторые малые некодирующие РНК другой группы, rasiRNA[англ.], считаются относящимися к piРНК[3][5].

Число обнаруженных piРНК составляет около 50 тысяч у млекопитающих и 13 тысяч у дрозофилы (Drosophila melanogaster)[6], что существенно больше числа известных малых РНК других классов. Поскольку значительная часть piРНК, особенно у млекопитающих, не связана с мобильными элементами, можно предполагать, что они выполняют и другие, ещё не описанные функции[3].

piРНК были открыты в 2006 году[3].

Структура

Предполагаемая структура piРНК

piРНК были обнаружены как у позвоночных, так и беспозвоночных, и, хотя особенности биогенеза и типы взаимодействия с мишенями могут отличаться у разных видов, имеется ряд консервативных черт, присущих всем piРНК. У piРНК не обнаружено никаких выраженных мотивов[англ.] вторичной структуры[7], их длина составляет 26—32 н., и в 80—90 % случаев и у позвоночных, и у беспозвоночных первым нуклеотидом на 5'-конце является уридин (U). У нематоды Caenorhabditis elegans на 5'-конце имеется фосфатная группа, а на 3'-конце имеет место 2'-O-метилирование[8]. Такая модификация была также выявлена у дрозофилы[9], данио-рерио[10], мыши[11] и крысы[10]. Фосфатная группа на 5'-конце имеется и у piРНК млекопитающих[3]. Значение такой модификации пока точно не установлено, но предполагается, что она увеличивает стабильность piРНК[3][10].

У мыши в семейство Piwi входят три белка: Mili, Miwi и Miwi2[3], у человека — HIWI (или PIWIL1), HILI (или PIWIL2), HIWI2 (или PIWIL4) и HIWI3 (или PIWIL3)[12].

Локализация

У млекопитающих около 17 % генов piРНК соответствует повторяющимся последовательностям, в том числе мобильным элементам. Стоит заметить, что количество piРНК, соответствующих повторам, меньше, чем доля повторов в геноме. Так, у грызунов эти соотношения равны 17 и ~42 % соответственно. Прочие piРНК кодируются уникальными генами, причём гены, кодирующие piРНК, располагаются в кластерах по всему геному. 90 % таких кластеров располагаются на участках, не содержащих аннотированных генов или повторов, но иногда могут находиться в интронах и экзонах[3]. Так, в то время как у D. melanogaster и позвоночных эти кластеры располагаются в участках, где отсутствуют белоккодирующие гены, у C. elegans гены piРНК располагаются среди белоккодирующих генов[5][8][13]. Каждый такой кластер может кодировать от 10 до многих тысяч piРНК, а его размер может варьировать от 1 до 100 килобаз[14]. Иногда кластеры piРНК располагаются рядом, но кодируются разными цепями; это может указывать на двунаправленную транскрипцию с общего промотора. Обнаружение и краткая аннотация кластеров piРНК в геномах осуществляется при помощи методов биоинформатики, которые всё более и более усложняются[15]. Хотя наличие кластеров генов piРНК высококонсервативно среди различных видов, этого нельзя сказать о последовательностях этих генов[16]. Например, хотя наиболее крупные кластеры piРНК грызунов имеют ортологов у человека, сходства последовательностей в этом случае не наблюдается[3].

Раньше считалось, что у млекопитающих piРНК и белки Piwi имеются только в семенниках[3]. Однако к настоящему времени установлено, что особая система piРНК имеется и в ооцитах млекопитающих[17]. Кроме того, показано, что при мейозе в ооцитах коровы экспрессируется дополнительный ген белков Piwi — PIWI-LIKE 3 (PIWIL3). Несмотря на это, piРНК у млекопитающих, по-видимому, функционируют только у самцов[18]. У беспозвоночных piРНК были выявлены как в клетках мужской, так и женской зародышевой линии[10].

На клеточном уровне piРНК были найдены и в ядре, и в цитоплазме, что свидетельствует о том, что piРНК могут функционировать и там, и там[5], и в связи с этим иметь множественные эффекты[19].

Образование и механизм действия

Внешние изображения
Биогенез и функционирование piРНК у дрозофилы и мыши

Уровень экспрессии piРНК меняется в ходе сперматогенеза. Они начинают детектироваться в пахитене (фаза профазы I деления мейоза) при делении диплоидных сперматоцитов мейозом (хотя образование piРНК начинается ещё в препахитенных клетках[20]), однако при образовании гаплоидных сперматид содержание piРНК в них резко падает, и в зрелой сперме они, судя по всему, отсутствуют[3].

Механизмы образования piРНК ещё не полностью установлены, хотя было предложено несколько возможных механизмов. В случаях, когда гены piРНК попадают в экзоны, piРНК соответствуют только смысловой (сенс-) цепи мРНК, поэтому они образуются только с одной цепи ДНК и, вероятно, являются производными длинных первичных транскриптов-предшественников. Это предположение согласуется с данными о наличии семенникоспецифичных EST[англ.] и мРНК, соответствующих локусам piРНК. Кроме того, в составе кластеров piРНК не выявлено развитых вторичных структур, характерных для pri-микроРНК. Поэтому процессинг piРНК, судя по всему, отличается от процессинга микроРНК и малых интерферирующих РНК. Об отсутствии двуцепочечных предшественников, характерных, в частности, для микроРНК, свидетельствует наличие только смысловых последовательностей у некоторых уникальных piРНК[3].

У дрозофилы и мыши в процессинге piРНК можно выделить два этапа: первичный процессинг и «пинг-понг»-цикл (амплификационная петля)[20].

Первичный процессинг

Как упоминалось выше, piРНК образуются из длинных транскриптов-предшественников. У дрозофил первичные транскрипты укорачиваются до piРНК-подобных малых РНК. Факторы, участвующие в этом процессе, ещё плохо изучены, однако недавние исследования показали, что, возможно, 5'-конец таких piРНК-подобных РНК образуется при помощи эндонуклеазы Zucchini. У мыши гомологом Zucchini является белок MitoPLD, также обладающий эндонуклеазными свойствами. После этого piРНК-подобные РНК связываются белками Piwi, вслед за этим их 3'-конец укорачивается ещё не описанной эндонуклеазой, и piРНК-подобные РНК приобретают размеры, соответствующие первичным piРНК. Возможно, важную роль в погрузке piРНК на белки Piwi играет белковый комплекс Hsp83/Shu. Далее piРНК 2'-O-метилируются комплексом HEN1/Pimet[20].

Цикл «пинг-понг»

PiРНК, подвергнувшаяся первичному процессингу, находится в состоянии, связанном с белками Piwi. Такие первичные piРНК являются антисмысловыми piРНК, комплементарными транскриптам мобильных элементов. У дрозофилы семейство белков Piwi представлено тремя белками: Piwi, Aubergine (Aub) и Ago3, но первичные piРНК связывают только белки Piwi и Aub. Комплексы Piwi с piРНК переносятся в ядро и в «пинг-понг»-цикле, происходящем в цитоплазме, не участвуют, однако участвуют в ядерном сайленсинге. Ассоциированные с Aub piРНК, комплементарно связывают транскрипты мобильных генетических элементов. Aub, как и другие белки группы Argonaute, способен разрезать фосфодиэфирную связь в РНК-мишени, расположенную напротив 10-го и 11-го нуклеотидов гидовой РНК (в данном случае — первичных piРНК). В результате разрыва образуется два фрагмента транскрипта мобильного элемента, у одного из которых 5'-конец отстоит на 10 нуклеотидов от 5'-конца первичной piРНК. Этот фрагмент — вторичная piРНК — в отличие от первичных piРНК некомплементарен транскрипту мобильного элемента и является смысловой piРНК. Поскольку чаще всего у первичных piРНК первый нуклеотид — уридин, то на 10-й позиции с 5'-конца у вторичных piРНК чаще всего располагается адениновый нуклеотид. Механизм процессинга 3'-конца вторичных piРНК пока неясен. Вторичная piРНК связывает белок Ago3 и направляется на разрезание первичного транскрипта-предшественника piРНК, из которого вырезается антисмысловая piРНК. Такие антисмысловые piРНК могут осуществлять сайленсинг мобильных элементов, а могут направлять образование новых смысловых piРНК. Таким образом, цикл «пинг-понг» совмещает процессинг piРНК и цитоплазматический сайленсинг мобильных элементов на уровне транскриптов. Он также даёт возможность усилить сайленсинг за счёт образования новых антисмысловых piРНК в ответ на усиление экспрессии мобильных элементов[3]. У дрозофилы в цикл «пинг-понг» могут вовлекаться не только первичные piРНК, но и piРНК, наследованные от матери. Цикл «пинг-понг» дрозофилы называют гетеротипным, так как в нём участвуют 2 различных белка Piwi — Aub и Ago3[20].

У мыши первичные piРНК связывают белки Mili и Miwi, а вторичные — белок Miwi2. Ассоциированные с Miwi piРНК, участвуют в цитоплазматическом сайленсинге, однако их мишени в большинстве своём неизвестны. Связанные с Mili первичные piРНК вовлекаются в цикл «пинг-понг». Образуемые в этом цикле вторичные piРНК, связываются с Miwi2, и комплекс piРНК с Miwi2 отправляется в ядро, где участвует в ядерном сайленсинге. Цикл «пинг-понг» мыши называют гомотипным, поскольку в нём участвует один белок Piwi — Mili. В образовании вторичных piРНК, связывающихся с Miwi2, определённую роль играет белковый комплекс HSP90/FKBP6. 2'-O-метилирование вторичных piРНК обеспечивает комплекс HEN1/Pimet[20].

У дрозофилы в соматических клетках половых желёз (например, в клетках фолликулов) белки Piwi также экспрессируются и связываются с первичными piРНК, однако белки Aub и Ago3 здесь экспрессируются на низком уровне, и для осуществления цикла «пинг-понг» их недостаточно[20].

По-видимому, схожий механизм репрессии мобильных элементов имеется и у данио-рерио[3]. Признаки наличия механизма «пинг-понг» обнаружены у самых примитивных животных — губок и стрекающих, что свидетельствует в пользу того, что механизм «пинг-понг» появился в самых ранних ветвях Metazoa и является консервативным механизмом репрессии мобильных элементов[3][21].

Другие белковые факторы

В биогенезе piРНК принимают участие и другие белки, не относящиеся к группе Piwi. В частности, таковы некоторые белки, относящиеся к суперсемейству Tudor (TDRD). Они содержат домен Tudor[англ.], который обеспечивает связывание TDRD-белка с другим белковым субстратом за счёт имеющихся у субстрата симметричных или асимметричных остатков диметиларгинина. У белков Piwi имеются симметричные остатки диметиларгинина рядом с N-концом, поэтому TDRD-белки способны связываться с ними и участвовать в РНК-сайленсинге[англ.]. По состоянию на 2011 год у дрозофилы было идентифицировано 11 TDRD-белков, участвующих в биогенезе piРНК, а у мыши было идентифицировано 7 таких TDRD-белков[20].

Например, было установлено, что мухи, мутантные по TDRD-белку Tud, фенотипически соответствуют мутантам по белку Aub. Белок Tud содержит 11 доменов Tudor и способен связываться как с Aub, так и с Ago3 за счёт симметричных остатков диметиларгинина, благодаря чему он служит «платформой» для «пинг-понг»-цикла. У мутантов по Tud белки Aub и Ago3 связывались с piРНК активнее, чем у мух дикого типа, что вызвало отклонения от нормального фенотипа[20].

Известно также несколько белков, участвующих в биогенезе piРНК и при этом не относящихся ни к Piwi, ни к TDRD-белкам. Так, у дрозофилы такой эффект был показан для следующих белков: Vasa (Vas), Maelstrom (Mael), Armi, Zuc, Squash (Squ) и Shu, причём все они, за исключением Squ, имеют гомологов у мыши. Большая часть этих факторов задействована в «пинг-понг»-механизме[20].

C. elegans

Внешние изображения
Образование и механизм действия piРНК у C. elegans

Установлено, у C. elegans имеются piРНК, но отсутствует механизм «пинг-понг»[22]. Однако недавние исследования биогенеза piРНК у C. elegans отчасти пролили свет на вопрос о том, как именно piРНК-опосредованная система защиты от паразитических мобильных элементов распознаёт «своё» и «чужое», подобно иммунной системе[20].

piРНК C. elegans имеют длину 21 нуклеотид и кодируются двумя кластерами на хромосоме IV, расположенными отдельно от белоккодирующих генов. На расстоянии ~42 нуклеотидов впереди от каждого кластера располагается последовательность CTGTTTCA, по-видимому, необходимая для осуществления транскрипции кластера РНК-полимеразой II. Синтезированные piРНК связываются с Piwi-белком PRG-1. Образовавшиеся комплексы piРНК с PRG-1 сканируют чужеродные транскрипты, причём для связывания с транскриптом достаточно неполной комплементарности (до 4 несоответствий). и запускают образование РНК-зависимых РНК-полимераз, которые обеспечивают образование и амплификацию особых малых интерферирующих РНК (22G-РНК). Последние связываются с белком WAGO — специфичным для C. elegans белком группы Argonaute. В цитоплазме эти комплексы обеспечивают сайленсинг генов на уровне мРНК, разрушая чужеродные транскрипты, а в ядре блокируют мобильные элементы на уровне транскрипции[20].

Распознавание «своего» и «чужого» и защита собственных транскриптов от разрушения, по-видимому, осуществляется на нескольких уровнях:

  • piРНК, обусловливающие сайленсинг генов самого организма, подвергаются отрицательному отбору. Конкретнее, в клетках зародышевой линии практически нет piРНК, которые допускают большое число несоответствий оснований при комплементарном связывании с мишенью. Дело в том, что комплементарность первичных piРНК транскриптам транспозонов может быть обусловлена тем, что кластеры piРНК и транспозоны перекрываются, а именно, их последовательности ДНК могут находиться на антипараллельных цепях и частично перекрываться друг с другом. Поэтому piРНК комплементарны транскриптам транспозонов меньше, чем обыкновенным клеточным транскриптам. Можно сказать, что кластеры piРНК представляют собой «ловушку» для транспозонов.
  • Дополнительную защиту «своей» мРНК обеспечивает связывания комплекса 22G-РНК с белком CSR-1, также относящимся к группе Argonaute. Возможно, он не вызывает разрушения связанной с ним мРНК, поскольку экспрессируется в меньшем количестве, чем WAGO, однако он предохраняет транскрипт от связывания с PRG-1. Более того, CSR-1 обеспечивает память о «своём» из прошедших процессов экспрессии генов в клетках зародышевой линии[20].

Функции, связанные с сайленсингом

За способность к сайленсингу мобильных элементов и обеспечению защиты генома от них piРНК получили название «стражей генома»[20]. По-видимому, у млекопитающих активность piРНК по сайленсингу транспозонов особенно важна в период развития зародыша, кроме того, и у человека, и у C. elegans необходимы для сперматогенеза[23][24]. Мутации, разрушающие систему сайленсинга мобильных элементов, опосредованного piРНК, у самцов мышей понижают фертильность или вовсе приводят к стерильности[3][25]. Возможно также, что некоторые заболевания репродуктивной системы человека, например, азооспермия, обусловлены дефектами в системе piРНК[20].

Отмечено некоторое действие piРНК на некоторые метилтрансферазы[англ.], осуществляющие метилирование, необходимое для распознавания и сайленсинга транспозонов, но эта связь ещё плохо понимаема[23].

Другие эффекты

Aplysia californica, выбрасывающая чернильную жидкость

piРНК могут передаваться по материнской линии, и для дрозофилы были показаны эпигенетические эффекты такого материнского наследования[13]. Активность специфических piРНК в эпигенетических процессах также требует взаимодействия piРНК с белками Piwi, HP1a и другими факторами[6]. Возможно, что piРНК участвуют в эпигенетической регуляции канцерогенеза[20].

У брюхоногого моллюска аплизии (Aplysia) (морского зайца) показано, что piРНК, содержащиеся в нейронах ЦНС, подавляют экспрессию гена CREB2 — репрессора памяти, индуцируя метилирование ДНК в его области и тем самым обеспечивая функционирование памяти. Кроме того, недавно piРНК были обнаружены в нейронах гиппокампа мыши. Вероятно, эти piРНК участвуют в формировании дендритных шипиков[20].

Методы изучения

Наибольшие достижения в изучении piРНК были достигнуты при помощи особых техник секвенирования, например, Solexa и 454. С их помощью можно анализировать такие гетерогенные и сложные популяции РНК, как piРНК. Малый размер этих РНК создаёт определённые сложности при их искусственной экспрессии и амплификации, однако для их преодоления разработаны специальные техники на основе полимеразной цепной реакции[26][27].

См. также

Примечания

  1. ↑ Марков А. В. Рождение сложности. Эволюционная биология сегодня. Неожиданные открытия и новые вопросы. — Москва: Астрель, Corpus, 2010. — С. 480—483. — 552 с. — ISBN 978-5-271-24663-0.
  2. ↑ 1 2 Seto A. G., Kingston R. E., Lau N. C. The coming of age for Piwi proteins. (англ.) // Molecular cell. — 2007. — Vol. 26, no. 5. — P. 603—609. — doi:10.1016/j.molcel.2007.05.021. — PMID 17560367. [исправить]
  3. ↑ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Макарова Ю. А., Крамеров Д. А. Некодирующие РНК (рус.) // Биохимия. — 2007. — Т. 72, № 11. — С. 1427—1448. Архивировано 14 июля 2014 года.
  4. ↑ Siomi M. C., Sato K., Pezic D., Aravin A. A. PIWI-interacting small RNAs: the vanguard of genome defence. (англ.) // Nature reviews. Molecular cell biology. — 2011. — Vol. 12, no. 4. — P. 246—258. — doi:10.1038/nrm3089. — PMID 21427766. [исправить]
  5. ↑ 1 2 3 Klattenhoff C., Theurkauf W. Biogenesis and germline functions of piRNAs. (англ.) // Development (Cambridge, England). — 2008. — Vol. 135, no. 1. — P. 3—9. — doi:10.1242/dev.006486. — PMID 18032451. [исправить]
  6. ↑ 1 2 Haifan Lin, Hang Yin, Ergin Beyret, Seth Findley, Wei Deng. The role of the piRNA pathway in stem cell self-renewal. (англ.) // Developmental Biology. — 2008. — Vol. 319, № 2. — P. 479. — doi:10.1016/j.ydbio.2008.05.048.
  7. ↑ Kandhavelu M,* Lammi C, Buccioni M, Dal Ben D, Volpini R, Marucci G. Existence of snoRNA, microRNA, piRNA characteristics in a novel non-coding RNA: x-ncRNA and its biological implication in Homo sapiens // Journal of Bioinformatics and Sequence Analysis. — 2009. — Vol. 1, № 2. — P. 031–040.
  8. ↑ 1 2 Ruby J. G., Jan C., Player C., Axtell M. J., Lee W., Nusbaum C., Ge H., Bartel D. P. Large-scale sequencing reveals 21U-RNAs and additional microRNAs and endogenous siRNAs in C. elegans. (англ.) // Cell. — 2006. — Vol. 127, no. 6. — P. 1193—1207. — doi:10.1016/j.cell.2006.10.040. — PMID 17174894. [исправить]
  9. ↑ Vagin V. V., Sigova A., Li C., Seitz H., Gvozdev V., Zamore P. D. A distinct small RNA pathway silences selfish genetic elements in the germline. (англ.) // Science (New York, N.Y.). — 2006. — Vol. 313, no. 5785. — P. 320—324. — doi:10.1126/science.1129333. — PMID 16809489. [исправить]
  10. ↑ 1 2 3 4 Houwing S., Kamminga L. M., Berezikov E., Cronembold D., Girard A., van den Elst H., Filippov D. V., Blaser H., Raz E., Moens C. B., Plasterk R. H., Hannon G. J., Draper B. W., Ketting R. F. A role for Piwi and piRNAs in germ cell maintenance and transposon silencing in Zebrafish. (англ.) // Cell. — 2007. — Vol. 129, no. 1. — P. 69—82. — doi:10.1016/j.cell.2007.03.026. — PMID 17418787. [исправить]
  11. ↑ Kirino Y., Mourelatos Z. Mouse Piwi-interacting RNAs are 2'-O-methylated at their 3' termini. (англ.) // Nature structural & molecular biology. — 2007. — Vol. 14, no. 4. — P. 347—348. — doi:10.1038/nsmb1218. — PMID 17384647. [исправить]
  12. ↑ Ross R. J., Weiner M. M., Lin H. PIWI proteins and PIWI-interacting RNAs in the soma. (англ.) // Nature. — 2014. — Vol. 505, no. 7483. — P. 353—359. — doi:10.1038/nature12987. — PMID 24429634. [исправить]
  13. ↑ 1 2 Brennecke J., Malone C. D., Aravin A. A., Sachidanandam R., Stark A., Hannon G. J. An epigenetic role for maternally inherited piRNAs in transposon silencing. (англ.) // Science (New York, N.Y.). — 2008. — Vol. 322, no. 5906. — P. 1387—1392. — doi:10.1126/science.1165171. — PMID 19039138. [исправить]
  14. ↑ O'Donnell K. A., Boeke J. D. Mighty Piwis defend the germline against genome intruders. (англ.) // Cell. — 2007. — Vol. 129, no. 1. — P. 37—44. — doi:10.1016/j.cell.2007.03.028. — PMID 17418784. [исправить]
  15. ↑ Rosenkranz D., Zischler H. proTRAC--a software for probabilistic piRNA cluster detection, visualization and analysis. (англ.) // BMC bioinformatics. — 2012. — Vol. 13. — P. 5. — doi:10.1186/1471-2105-13-5. — PMID 22233380. [исправить]
  16. ↑ Malone C. D., Hannon G. J. Small RNAs as guardians of the genome. (англ.) // Cell. — 2009. — Vol. 136, no. 4. — P. 656—668. — doi:10.1016/j.cell.2009.01.045. — PMID 19239887. [исправить]
  17. ↑ Tam O. H., Aravin A. A., Stein P., Girard A., Murchison E. P., Cheloufi S., Hodges E., Anger M., Sachidanandam R., Schultz R. M., Hannon G. J. Pseudogene-derived small interfering RNAs regulate gene expression in mouse oocytes. (англ.) // Nature. — 2008. — Vol. 453, no. 7194. — P. 534—538. — doi:10.1038/nature06904. — PMID 18404147. [исправить]
  18. ↑ Silva, Ricardo Andrés Zacarias. Piwi proteins in mammals: a cow's perspective. (неопр.). — 2011. — P. 4. — 50 p. Архивировано 14 июля 2014 года.
  19. ↑ Ruvkun G. Tiny RNA: Where do we come from? What are we? Where are we going? (англ.) // Trends in plant science. — 2008. — Vol. 13, no. 7. — P. 313—316. — doi:10.1016/j.tplants.2008.05.005. — PMID 18562240. [исправить]
  20. ↑ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Ishizu H., Siomi H., Siomi M. C. Biology of PIWI-interacting RNAs: new insights into biogenesis and function inside and outside of germlines. (англ.) // Genes & development. — 2012. — Vol. 26, no. 21. — P. 2361—2373. — doi:10.1101/gad.203786.112. — PMID 23124062. [исправить]
  21. ↑ Grimson A., Srivastava M., Fahey B., Woodcroft B. J., Chiang H. R., King N., Degnan B. M., Rokhsar D. S., Bartel D. P. Early origins and evolution of microRNAs and Piwi-interacting RNAs in animals. (англ.) // Nature. — 2008. — Vol. 455, no. 7217. — P. 1193—1197. — doi:10.1038/nature07415. — PMID 18830242. [исправить]
  22. ↑ Das P. P., Bagijn M. P., Goldstein L. D., Woolford J. R., Lehrbach N. J., Sapetschnig A., Buhecha H. R., Gilchrist M. J., Howe K. L., Stark R., Matthews N., Berezikov E., Ketting R. F., Tavaré S., Miska E. A. Piwi and piRNAs act upstream of an endogenous siRNA pathway to suppress Tc3 transposon mobility in the Caenorhabditis elegans germline. (англ.) // Molecular cell. — 2008. — Vol. 31, no. 1. — P. 79—90. — doi:10.1016/j.molcel.2008.06.003. — PMID 18571451. [исправить]
  23. ↑ 1 2 Aravin A. A., Sachidanandam R., Bourc'his D., Schaefer C., Pezic D., Toth K. F., Bestor T., Hannon G. J. A piRNA pathway primed by individual transposons is linked to de novo DNA methylation in mice. (англ.) // Molecular cell. — 2008. — Vol. 31, no. 6. — P. 785—799. — doi:10.1016/j.molcel.2008.09.003. — PMID 18922463. [исправить]
  24. ↑ Wang G., Reinke V. A C. elegans Piwi, PRG-1, regulates 21U-RNAs during spermatogenesis. (англ.) // Current biology : CB. — 2008. — Vol. 18, no. 12. — P. 861—867. — doi:10.1016/j.cub.2008.05.009. — PMID 18501605. [исправить]
  25. ↑ Barrett et. al., 2013, p. 37.
  26. ↑ Ro S., Park C., Jin J., Sanders K. M., Yan W. A PCR-based method for detection and quantification of small RNAs. (англ.) // Biochemical and biophysical research communications. — 2006. — Vol. 351, no. 3. — P. 756—763. — doi:10.1016/j.bbrc.2006.10.105. — PMID 17084816. [исправить]
  27. ↑ Tang F., Hayashi K., Kaneda M., Lao K., Surani M. A. A sensitive multiplex assay for piRNA expression. (англ.) // Biochemical and biophysical research communications. — 2008. — Vol. 369, no. 4. — P. 1190—1194. — doi:10.1016/j.bbrc.2008.03.035. — PMID 18348866. [исправить]

Литература

Ссылки

Strategi Solo vs Squad di Free Fire: Cara Menang Mudah!