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Reagente de Ellman (DTNB) Alerta sobre risco à saúde^[1]

Outros nomes	3,3′-Disulfanediylbis(6-nitrobenzoic acid) 5-(3-Carboxy-4-nitrophenyl)disulfanyl-2-nitrobenzoic acid Dithionitrobenzoic acid 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)
Identificadores
Abreviação	DTNB
Número CAS	69-78-3
PubChem	6254
ChemSpider	6018
ChEBI	86228
SMILES	`c1cc(c(cc1SSc2ccc(c(c2)C(=O)O)[N+](=O)[O-])C(=O)O)[N+](=O)[O-]`
InChI	1/C14H8N2O8S2/c17-13(18)9-5-7(1-3-11(9)15(21)22)25-26-8-2-4-12(16(23)24)10(6-8)14(19)20/h1-6H,(H,17,18)(H,19,20)
Propriedades
Fórmula química	C₁₄H₈N₂O₈S₂
Massa molar	396.31 g mol^-1
Ponto de fusão	240-245 °C, 268 K, -169 °F
Página de dados suplementares
Estrutura e propriedades	n, ε_r, etc.
Dados termodinâmicos	Phase behaviour Solid, liquid, gas
Dados espectrais	UV, IV, RMN, EM
Exceto onde denotado, os dados referem-se a materiais sob condições normais de temperatura e pressão Referências e avisos gerais sobre esta caixa. Alerta sobre risco à saúde.

O reagente de Ellman (5,5'-ditiobis-(ácido 2-nitrobenzóico) ou DTNB) é um produto químico usado para quantificar o número ou a concentração de grupos tiol em uma amostra. Foi desenvolvido por George L. Ellman.^[2]

Preparação

No artigo de Ellman (1959),^[2] ele preparou este reagente oxidando 2-nitro-5-clorobenzaldeído ao ácido carboxílico, introduzindo o tiol via sulfeto de sódio e acoplando o monômero por oxidação com iodo . Hoje, este reagente está prontamente disponível comercialmente.

Teste de Ellman

Tióis reagem com este composto, clivando a ligação dissulfeto para dar 2-nitro-5-tiobenzoato (TNB⁻), que ioniza para o di-ânion TNB²⁻ em água em pH neutro e alcalino. Este íon TNB ²⁻ tem uma cor amarela.

Reação de DTNB com um tiol (R-SH).

Essa reação é rápida e estequiométrica, com a adição de um mol de tiol liberando um mol de TNB. O TNB ^2- é quantificado em um espectrofotômetro medindo a absorbância da luz visível em 412 nm, usando um coeficiente de extinção de 14.150 M ^-1 cm ^-1 para soluções tampão diluídas,^[3]^[4] e um coeficiente de 13.700 M ^-1 cm ^-1 para altas concentrações de sal, como 6 M cloridrato de guanidínio ou 8 M uréia.^[4] Infelizmente, o coeficiente de extinção para soluções diluídas foi subestimado na publicação original de 1959, pois 13.600 M ^-1 cm ⁻¹, e como observado em um artigo recente, esse erro persistiu na literatura.^[5] O DTNB comercial pode não ser completamente puro, por isso pode exigir recristalização para obter resultados completamente precisos e reprodutíveis.^[4]

O reagente de Ellman pode ser usado para medir tióis de baixa massa molecular, como glutationa, tanto em soluções puras quanto em amostras biológicas, como sangue.^[6] Também pode medir o número de grupos tiol nas proteínas.^[6]

Referências

↑ 5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) at Sigma-Aldrich
↑ ^a ^b Ellman GL (1959). «Tissue sulfhydryl groups». Arch. Biochem. Biophys. 82 (1): 70–7. PMID 13650640. doi:10.1016/0003-9861(59)90090-6
↑ Collier HB (1973). «Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate». Anal. Biochem. 56 (1): 310–1. PMID 4764694. doi:10.1016/0003-2697(73)90196-6
↑ ^a ^b ^c «[8] Reassessment of Ellman's reagent». Reassessment of Ellman's reagent. Col: Methods in Enzymology. 91. [S.l.: s.n.] 1983. pp. 49–60. ISBN 978-0-12-181991-0. PMID 6855597. doi:10.1016/S0076-6879(83)91010-8
↑ Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). «Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine». Anal Bioanal Chem. 373 (4–5): 266–76. PMID 12110978. doi:10.1007/s00216-002-1347-2
↑ ^a ^b Riener, Christian K.; Kada, Gerald; Gruber, Hermann J. (1 de julho de 2002). «Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4′-dithiodipyridine». Analytical and Bioanalytical Chemistry (em inglês). 373 (4–5): 266–276. ISSN 1618-2642. PMID 12110978. doi:10.1007/s00216-002-1347-2