父ジュニアス・ブースは当時のアメリカ演劇界でよく知られた俳優（シェイクスピア役者）の一人だった。彼が1852年に死んだ時、詩人ウォルト・ホイットマンは「最も偉大で最も高貴なローマ人は逝った。"There went the greatest and by far the most noble Roman of them all."」 と綴った。
兄エドウィン・ブース（Edwin Thomas Booth）はアメリカで初めて『ハムレット』などを脚本どおり演じたシェイクスピア役者であり、「演劇界の貴公子」と呼ばれた。暗殺前にリンカーンの息子ロバート・トッド・リンカーンを汽車の事故から救ったことがあり、妻メアリー・デブリンは娘エドウィナを生んで亡くなっていた。妻の死や弟の起こした暗殺事件後に2度引退したが、その後カムバックしている。
1865年4月14日フォード劇場で『われらのアメリカのいとこ』（Our American Cousin）（イギリス貴族遺産相続にアメリカ人の甥がからむ喜劇）を観劇中のリンカーンに対し1.2mの至近距離からデリンジャーピストルで後頭部左耳後5cmに1発撃った。ブースは羅: “Sic semper tyrannis!”（専制者は常にかくのごとし、バージニア州のモットー）と叫び（「これで南部の報復は果たされた」と叫んだともいわれる）、共に観劇していたヘンリー・ラスボーン（英語版）少佐がとびかかるもナイフで腕を切って振り払い、バルコニーから舞台へと飛び降り、劇場の裏手に用意していた馬に乗って海軍基地の橋まで逃走した。この橋は夜9時以降通行禁止だったため、守衛のコップ軍曹に通行をとどめられたが、なんとかいいくるめて橋を渡った。このあと、南軍の協力者たちの家をわたりながら、ポトマック川を渡ることに成功した。しかし、深南部に逃げ込むという計画は果たせず、10日間の逃走と潜伏の後、4月24日にリチャード・ギャレットという男の農場にたどりついたが、25日夜にタバコ小屋の中で寝ていたところをギャレットの家族によって閉じ込められ、追ってきた29名の騎兵隊に包囲された。騎兵隊はブースに投降を呼びかけたが、ブースは拒否。やがてデイヴィッド・ヘロルドのみ投降し、エヴァートン・コンガー（英語版）大佐の指示によって小屋の周りに火がつけられた。その火によって照らされたブースを騎兵隊の一員ボストン・コーベット（英語版）軍曹が後方から射撃したため、このときの首の傷が致命傷になって4月26日朝、ブースは命を落とした。
