Se destinant tout d'abord à devenir avocat, Enrico Tamberlick s'oriente finalement vers une carrière lyrique et débute en 1841 à Naples au Teatro Fondo. Il devient rapidement un ténor reconnu.
Considéré comme l'un des derniers représentants des chanteurs italiens, il poursuit avec succès une carrière à travers l'Europe (débuts à Covent-Garden en 1850) et l'Amérique (Buenos-Aires en 1857). Il excelle dans un répertoire très large, avec des opéras de Bellini, Rossini et surtout Verdi.
Très présent à Paris, où il vient chanter une première fois en 1858 dans l'Otello de Rossini (au Théâtre italien), il y termine sa carrière en 1877 et y meurt le . Il est inhumé au cimetière du Père-Lachaise (11e division).
Vocalement, Tamberlick est un héritier de Gilbert Duprez, avec une voix puissante et des aigus émis en voix de poitrine, jusqu'à l'ut dièse.