顏春輝的父親是顏振聲(1876年-1949年);他年輕時曾在新樓醫館跟隨金醫生(Dr. W. Murray Cairns)習醫,後轉至彰化基督教醫院跟隨蘭大衛(David Landsborough)醫生習醫,是蘭大衛於1897年在臺灣招收的第一批學生,也是19世紀末20世紀初最早接受教會醫院訓練的臺灣籍醫生。學成後,顏振聲回臺南開業,後曾任新樓醫院院長(1942年-1944年)。此外,顏春輝有一兄長顏春和;顏春和自幼即離鄉前往日本求學,後成為律師並在臺南市高砂町開辦事務所[3][4]。[1]
顏春輝自小成長於臺南。1919年,他進入長老教中學校就讀;畢業前,新樓醫院院長馬雅各醫師(Dr. James Maxwell)之弟馬約翰醫生(Dr. Preston Maxwell)在臺南訪問時建議他前往北平協和醫學院習醫。隨後,顏春輝於畢業該年3月前往廈門就讀中學,並於數月後考取福建協和大學,後於9月入學;一年後,他再轉往北京考進北平協和醫學院。[1]
當時,協和醫學院採取北美醫學教育系統,學生必須完成醫預科後方可進入協和醫學院就讀正科;因此,顏春輝先在燕京大學完成理學院課程,後於1928年取得燕京大學與紐約州大學理學士學位。1932年,顏春輝於協和醫學院取得醫學士(MD)學位,並在畢業後留校擔任細菌免疫學助教。1937年,顏春輝獲洛克斐勒基金會獎學金,前往多倫多大學衛生學院(School of Hygiene)進修並取得公共衛生學碩士學位。隨後,顏春輝前往歐美諸國參訪當地醫學教育與公共衛生設施,復於1942年返回協和醫學院擔任教職,又於後來轉任北京大學醫學院細菌科主任,並陸續兼任南京中央衛生實驗院研究員與北平檢驗人員訓練班主任等職位。[1]