Tổng cộng có 32 đội (4 đội thắng ở vòng sơ loại, 1 đội còn lại ở Serie C, 15 đội còn lại ở Serie B và 12 đội Serie A hạt giống 9–20) thi đấu ở vòng này, 16 đội chiến thắng tiến vào vòng sau.
Vòng 16 đội sẽ diễn ra giữa 8 đội thắng ở vòng trước và các câu lạc bộ còn lại ở Serie A được xếp hạt giống từ 1–8. Các trận đấu được tổ chức từ tháng 12 năm 2023 đến đầu tháng 1 năm 2024.
^“Coppa Italia: Regolamento” [Cúp quốc gia Ý: Quy định] (PDF) (bằng tiếng Ý). Lega Serie A. 8 tháng 6 năm 2021. Bản gốc(PDF) lưu trữ ngày 29 tháng 6 năm 2021. Truy cập ngày 27 tháng 6 năm 2021.