Обійняв посаду у 306 році після смерті свого брата, єпископа Проба. Перший єпископ, який обіймав посаду під час правління першого імператора-християнина Константина І Великого. За переказами, Митрофан був одним з ініціаторів вибору Візантія як нової столиці імперії.