De Plantage Middenlaan is een straat in de Plantagebuurt in Amsterdam-Centrum. Het is de hoofdstraat van de Plantagebuurt en dateert uit de grote stadsuitbreiding van 1658. De Plantage Middenlaan ligt in het verlengde van de Muiderstraat en loopt in zuidoostelijke richting naar het Alexanderplein. Hij wordt gekruist door de Plantage Kerklaan.
Desmet Studio's Amsterdam, het voormalige Theater Frascati, dat ook een tijd het Rika Hoppertheater heette, aan de Plantage Middenlaan 4, werd in 1946 verbouwd tot filmtheater Desmet. Hier worden radio- en tv-uitzendingen opgenomen en live uitgezonden,
Door de Plantage Middenlaan rijdt tramlijn 14 en nachtbus N87.
Vanaf 1883 reed de paardentram (de lijn Dam – Linnaeusstraat) door de Plantage Middenlaan. Deze werd in 1903 vervangen door de elektrische tram met de instelling van lijn 9. Lijn 14 reed hier tussen 1915 en 1942 en keerde in 1982 terug. Ook andere lijnen zoals 6, 7, 9 (1903-2018), 10, 11, 15, 20, 21 en 26 reden door de Plantage Middenlaan.