קולט נולדה בעיר סידני, ניו סאות' ויילס שבאוסטרליה, הבכורה מתוך שלושה ילדים; יש לה שני אחים צעירים. היא גדלה בפרוור גליב שבסידני עד גיל 6, ולאחר מכן התגוררה בפרוור בלקטאון. אביה, בוב קולט היה נהג משאית, ואימה, ג'ודי (לבית קוק), הייתה נציגת שירות לקוחות. בילדותה היא השתתפה בתחרויות שירה מקומיות. שאיפתה הייתה להופיע במחזות זמר, שכן היא אהבה לשיר ולרקוד.
תפקיד המשחק הראשון של קולט היה בגיל 14 בהפקה בית-ספרית של המחזה "Godspell"; היא עשתה אודישן עם השיר "Saving All My Love for You" של וויטני יוסטון. בתחילת 1991 היא החלה ללמוד במכון הלאומי לאמנויות הדרמה (NIDA), אך עזבה לאחר 18 חודשים כדי להופיע בתור סוניה במחזה "הדוד וניה" (הוצג באוגוסט–ספטמבר 1992), שם שיחקה לצד ג'פרי ראש בתפקיד הראשי.
קריירה
בשנת 1995 גילמה קולט את מיוריאל הסלופ בסרט "חתונתה של מיוריאל", תפקיד עבורו עלתה 18 קילוגרם במשקלה תוך שבעה שבועות. עבור תפקיד זה היא זכתה בפרס המכון האוסטרלי לקולנוע והייתה מועמדת לפרס גלובוס הזהב.
קולט הקימה את הלהקה "Toni Colette & the Finish", בה חבר גם בעלה. באוקטובר 2006 יצא אלבום הבכורה של הלהקה, Beautiful Awkward Pictures, לו כתבה קולט את כל השירים. ב-2007 הופיעה הלהקה בסידני כחלק מהאירוע Live Earth.
ב-2008 כיכבה קולט בסדרת הטלוויזיה "טרה" בה גילמה דמות של עקרת בית, אם ואמנית המתמודדת עם הפרעת זהות דיסוציאטיבית.
בשנת 2009 זכתה קולט בפרס אמי לשחקנית ראשית בקומדיה על תפקידה בסדרה "טרה". משחקה בסדרה זיכה אותה גם בפרס גלובוס הזהב בקטגוריית השחקנית הטובה ביותר בסדרה קומית.
בשנות העשרים לחייה היא התקשתה להסתגל לחיות באור הזרקורים, וכתוצאה מכך נאבקה בבולימיה והתקפי חרדה. בתקופה זו היא גילחה את ראשה חמש פעמים (פעם אחת לתפקיד קולנועי).
בשנת 1997 קולט יצאה עם השחקן האירי ג'ונתן רייס מאיירס במשך כשנה, ותיארה את מערכת היחסים שלהם כ"נהנתנית וכנראה מסוכנת."
ב-31 בינואר2003 היא נישאה למוזיקאי דייב גאלאפסי, עמו התחתנה בטקס בודהיסטי-מסורתי על אף שאינה מגדירה עצמה כבודהיסטית. לזוג יש בת, סייג' פלורנס, שנולדה ב-9 בינואר2008, ובן, ארלו רוברט, שנולד ב-22 באפריל2011. הם חיו בסידני בשנות ה-2000 לפני שעברו ללוס אנג'לס. המשפחה חזרה לסידני ב-2019.