Jodi Lyn O'Keefe est la fille de Noreen et Jack O'Keefe d'origine irlandaise, tchèque, autrichienne, polonaise et suédoise. Elle est la cadette de trois sœurs, elle devient mannequin dès l'âge de 8 ans prenant exemple sur sa sœur aînée Heather. Jeune, elle travaille déjà pour diverses sociétés tels que Gitano jeans et DreamPhone.
À l'adolescence, elle étudie dans une école catholique avant de la quitter pour rejoindre le feuilleton Another World : Bay City. Ayant obtenu un rôle dans la série Nash Bridges de 1996 à 2001 (Cassidy Bridges), elle déménage avec sa mère à Hollywood et poursuit sa scolarité par correspondance.
Jodi Lyn O'Keefe fait ses débuts sur grand écran en 1998 dans le film Halloween, 20 ans après (Halloween H20: 20 years later). Mais c'est en incarnant la snob, riche et populaire lycéenne Taylor Vaughan dans le teen show Elle est trop bien (1999) qu'elle brille sous les feux des projecteurs. À la question « Est-il dur pour vous de jouer un tel personnage ? » Jodi répond « Tout le monde connaissait une Taylor Vaughan au lycée, en travaillant dans l'industrie du spectacle, vous rencontrez des filles comme ça quotidiennement. »
Elle joue aussi dans les cinématiques vidéo de Command and Conquer Alerte Rouge 3 - La Révolte, où elle incarne le porte-parole de FutureTech, entreprise de défense basée à Amsterdam aux projets obscurs.
