El Campeonato Ecuatoriano de Fútbol Serie B 2000, conocido oficialmente como «Campeonato Nacional de Fútbol Serie B 2000», fue la 23.ª edición de la Serie B del Campeonato nacional de fútbol profesional en Ecuador, mientras que fue la 36.ª edición incluyendo los torneos cortos conocidas como etapas. El torneo fue organizado por la Federación Ecuatoriana de Fútbol y contó con la participación de diez clubes de fútbol. El campeón del certamen fue LDU(P).
En este torneo se incorporó Dep.Saquisilí, campeón de la Segunda Categoría de 1999; además de los descendidos de la Serie A: Delfín, Dep.Cuenca y Audaz Octubrino.
Se disputó un torneo de 36 fechas por el sistema de todos contra todos a dos etapas, ida y vuelta.
El campeón y el subcampeón de la temporada ascendieron directamente a la Serie A.
El último club de la tabla de posiciones descendió a la Segunda Categoría.
Tomaron parte en las competición 10 equipos, entre ellos se destaca el retorno de los históricos Delfín, tras 3 años ausente de la categoría, Deportivo Cuenca, tras 5 años ausente de la categoría y Audaz Octubrino, tras 2 años ausente de la categoría.
PJ = Partidos jugados; PG = Partidos ganados; PE = Partidos empatados; PP = Partidos perdidos; GF = Goles a favor; GC = Goles en contra; DG = Diferencia de gol; PTS = Puntos