Southern League 1900–01 var den syvende sæson af den engelskefodboldligaSouthern League. Ligaen havde deltagelse af 25 hold, der var opdelt i to divisioner med 16 og 9 hold, der hver spillede en dobbeltturnering alle-mod-alle. Division One blev vundet af Southampton FC, som dermed vandt ligaen for fjerde gang på fem sæsoner.
K: Kampe spillet, V: Vundne kampe, U: Uafgjorte kampe, T: Tabte kampe, Mf: Mål for, Mi: Mål imod, +/-: Målkvotient, P: Point
Testkampe
De to lavest placerede hold i Division One spillede testkampe mod nr. 1 og 2 i Division Two op- og nedrykning mellem divisionerne. Begge kampene endte 0-0, og det betød at Division One-holdene beholdt deres plads i divisionen. Af Division Two-holdene blev Brentford FC rykket op i Division One, mens Grays United FC ikke blev rykket op, da holdet nægtede at spille forlænget spilletid i sin testkamp.