Hovězí sérový albumin

Hovězí sérový albumin

Hovězí sérový albumin (BSA, bovine serum albumine) je jedním z mnoha albuminů (proteinů krevního séra).

Laboratorní použití

BSA je jedním ze základních proteinů v biochemické laboratoři a nachází uplatnění v mnoha experimentech. Nejčastější použití:

• referenční (modelový) protein se kterým se srovnávají vlastnosti jiných proteinů
• marker molekulových hmotností (SDS-elektroforesa, nativní elektroforesy, gelová chromatografie)
• blokátor volných vazebných míst (ELISA, ELBA, western blotting)
• proteinová součást různých médii pro práci s buňkami
• nosič haptenů při imunizaci a při imunoesejích

Vlastnosti BSA

Řetězec obsahuje 583 aminokyselin, které jsou větveny do dvou řetězců.

Fyzikální vlastnosti BSA:

• Počet aminokyselinových zbytků: 583
• Molekulární váha: 66 463 Da (= 66,5 kDa)
• izoelektrický bod ve vodě při 25 °C: 4.7^[1]
• Extinkční koeficient 43,824 M⁻¹cm⁻¹ při 279 nm^[2]
• Velikost: 140 × 40 × 40 Å (protáhlý elipsoid, kde a = b < c)^[3]
• pH 1% roztoku: 5.2-7^[4][5]
• Optická rotace: [α]₂₅₉: -61°; [α]₂₆₄: -63°
• Stokesův poloměr (r_s): 3.48 nm^[6]
• Sedimentační konstanta, S_20,W × 10¹³: 4.5 (monomer), 6.7 (dimer)^[4][5]
• Difuzní konstanta, D_20,W × 10⁻⁷ cm²/s: 5.9^[4][5]
• Částečný specifický objem, V₂₀: 0.733^[4][5]
• Vnitřní viskozita, η: 0.0413^[4][5]
• Frikční koeficient, f/f0: 1.30^[4][5]
• Přírůstek indexu lomu (578 nm) × 10⁻³: 1.90^[4][5]
• Optická absorbance, A^279 nm_1 g/L: 0.667^[4][5]

Izolace BSA

Vzorek hovězího sérového albuminu (BSA)

BSA tvoří asi 50 % všech proteinů séra skotu. Izoluje se tzv. Cohnovým procesem (extrakcí), která využívá rozdílné rozpustnosti BSA a jiných sérových proteinů v prostředích o různém pH, koncentraci ethanolu, iontové síle a teplotě. Víceméně čistý BSA (s příměsí imunoglobulinů) se označuje také jako V. Cohnova frakce. Pokud je zapotřebí ještě větší čistoty, je nutné tuto frakci podrobit dalšímu přečištění (např. chromatografii na Blue-Sepharose). Za nativních podmínek se vyskytuje jako směs monomeru a dimeru.

Biologická funkce BSA

Díky hydrofobní kapse na svém povrchu slouží v krvi jako nosič hydrofobních látek, které by měly jinak příliš nízkou rozpustnost (např. steroidní hormony) podobně jako jiné analogické sérové albuminy (např. lidský sérový albumin – HSA, prasečí sérový albumin – PSA). Díky vysoké koncentraci BSA v krvi se významně uplatňuje i jako pufrační činidlo a napomáhá tak udržovat stabilní pH krve.

Reference

1. Ge S, Kojio K, Takahara A, Kajiyama T (1998). "Bovine serum albumin adsorption onto immobilized organotrichlorosilane surface: influence of the phase separation on protein adsorption patterns". Journal of Biomaterials Science. Polymer Edition. 9 (2): 131–50. doi:10.1163/156856298x00479. PMID 9493841.
2. Peters T (1975). Putman FW, ed. The Plasma Proteins. Academic Press. pp. 133–181.
3. Wright AK, Thompson MR (Feb 1975). "Hydrodynamic structure of bovine serum albumin determined by transient electric birefringence". Biophysical Journal. 15 (2 Pt 1): 137–41. doi:10.1016/S0006-3495(75)85797-3. PMC 1334600. PMID 1167468.
4. Putnam FW (1975). The Plasma Proteins: Structure, Function and Genetic Control. 1 (2nd ed.). New York: Academic Press. pp. 141, 147. ASIN B007ESU1JQ.
5. Albumin from bovine serum" Archivováno 8. 10. 2013 na Wayback Machine. (PDF). Sigma-Aldrich. Retrieved 5 July 2013.
6. Axelsson I (May 1978). "Characterization of proteins and other macromolecules by agarose gel chromatography". Journal of Chromatography A. 152 (1): 21–32. doi:10.1016/S0021-9673(00)85330-3.