Guido Ascanio Sforza di Santa Fiora (26 November 1518 — 6 Oltober 1564) merupakan seorang kardinal Italia, yang dikenal juga sebagai Kardinal Santa Fiora.
Lahir di Roma, ia merupakan putra dari Costanza Farnese dan cucu dari Paus Paulus III, saudara dari Kardinal Alessandro Sforza (1565), paman dari Kardinal Francesco Sforza dan paman dari ayahnya Kardinal Federico Sforza (1645).
Guido Ascanio Sforza wafat pada 6 Oktober 1564 karena demam di Mantua. Jenazahnya dibawa ke Roma dan dimakamkan di kapel keluarga-nya di biara basilika Liberian.