Запрос «RT-PCR» перенаправляется сюда; если вас интересует ПЦР в реальном времени (Real-time PCR), или количественная ПЦР (quantitative PCR), см. ПЦР в реальном времени.
ОТ-ПЦР
В молекулярной биологии метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (англ.reverse transcription polymerase chain reaction) принято обозначать как ОТ-ПЦР (англ.RT-PCR). ОТ-ПЦР представляет собой метод амплификации специфического фрагмента рибонуклеиновой кислоты (РНК).[1]
Одноцепочечную молекулу РНК превращают в реакции обратной транскрипции (ОТ, англ.RT, reverse transcription) в комплементарную ДНК (cDNA) и далее амплифицируют уже одноцепочечную молекулу ДНК, используя традиционную ПЦР. RT-PCR не следует путать с ПЦР в реальном времени (англ.Real-time PCR, Q-PCR), которую также иногда неверно сокращают как RT-PCR.[2]
Для превращения последовательности РНК в комплементарную ДНК используют обратную транскриптазу:
1. Реакция первой цепочки:
Комплементарная ДНК (cDNA) образуется на матрице мРНК из dNTP ферментом обратной транскриптазой. Компоненты реакции смешиваются с ДНК-праймером и буфером с обратной транскриптазой на один час при 37 °C.
2. Реакция второй цепочки:
После того как обратная транскрипция закончена и образована cDNA на матрице мРНК, следующие циклы производятся по стандартной методике ПЦР.
После 30 циклов амплификации образуются миллионы копий нужной последовательности.[2]
Применение
ОТ-ПЦР используется для обнаружения молекул РНК в образце с заранее известным участком последовательности, комплементарным праймеру. Экспоненциальная амплификация при помощи ОТ-ПЦР является чувствительной методикой, с помощью которой может быть обнаружено малое количество молекул РНК.
Также ОТ-ПЦР широко используется для диагностики генетических заболеваний и полуколичественного определения специфических молекул РНК в клетке или ткани как индикатор экспрессии соответствующих генов[3].
