Les courtisans commentent la disgrâce de la reine Anna Bolena (Anne Boleyn), car le roi Enrico (Henri VIII) lui préfère une de ses demoiselles de compagnie, Giovanna (Jeanne Seymour). Cette dernière fait son entrée, elle a mauvaise conscience mais ne peut s'empêcher d'aimer le roi. Anna Bolena arrive, elle ne sait pas qui est sa rivale. Elle demande à son page Smeton de chanter, mais la chanson qu'il chante la trouble et elle l'interrompt. Tous se retirent et Giovanna reste seule. Enrico la rejoint, elle lui dit ne plus vouloir d'un amour clandestin. Enrico lui promet alors le mariage, et lui promet également de se débarrasser d'Anna, accusée d'adultère, sans faire preuve de cruauté.
Le roi rappelle d'exil Riccardo Percy, ancien fiancé de la reine, pour la piéger. Percy aime encore Anna et est très heureux de la revoir. Anna est troublée. Lord Rochefort, le frère d'Anna et l'ami de Percy, s'inquiète. Le roi demande à Hervey de surveiller Anna et Percy.
Le page Smeton, secrètement amoureux de la reine, s'est introduit dans ses appartements et a dérobé son portrait. Il se dissimule lorsqu'Anna arrive. Il voit Percy lui déclarer sa flamme, mais Anna, terrorisée, le repousse. Percy dégaine alors son épée et menace de se tuer. Smeton sort de sa cachette pour l'en empêcher. Rochefort, puis Enrico arrivent. Enrico estime qu'il a pris Anna sur le fait, Il fait arrêter Percy, Rochefort et Smeton et prévient Anna qu'elle sera jugée.
Acte 2
Giovanna implore la reine : elle doit plaider coupable pour sauver sa tête. Elle lui avoue aussi que c'est elle sa rivale. Anna finit par lui pardonner.
Hervey dit à la reine que Smeton a fait des aveux qui la compromettent. Anna supplie Enrico de lui épargner le déshonneur d'un procès. Percy disculpe Anna, et Anna déclare que son seul crime a été de sacrifier son amour pour Percy pour le trône. Malgré les supplications de Giovanna, Enrico condamne Anna, Percy, Rochefort et Smeton à mort.
Hervey annonce à Percy et Rochefort que le roi les gracie, mais les deux hommes refusent de vivre si Anna doit mourir.
Emprisonnée dans la tour de Londres, Anna a perdu la raison et s'imagine au jour de ses noces. Les 4 condamnés sont exécutés alors que les réjouissances pour le mariage d'Enrico et Giovanna battent leur plein.
↑George Lascelles Harewood, Marie-Caroline Aubert, Dennis Collins et Marie-Stella Pâris, Tout l'opéra [de Monteverdi à nos jours], R. Laffont, (ISBN2-221-07131-X et 978-2-221-07131-1, OCLC489971357), p. 316