Barbora Štěpánová studierte Schauspiel und Gesang am Prager Konservatorium. Anschließend spielte sie auf mehreren Theaterbühnen, darunter dem Divadlo vítězného února in Hradec Králové und dem Divadlo Josefa Kajetána Tyla in Pilsen. Ihr Leinwanddebüt gab sie in dem 1971 erschienenen und von Vladimír Čech inszenierten historischen Kriegsdrama Klíc an der Seite von František Vicena und Wilhelm Koch-Hooge.
1986 gehörte Štěpánová zu den Unterzeichnern der Charta 77, einer Petition gegen die Menschenrechtsverletzungen des kommunistischen Regimes in der Tschechoslowakei.
Filmografie (Auswahl)
1971: Klíč
1980: Begegnung im Juli (Setkání v červenci)
1980: Liebe zwischen Regentropfen (Lásky mezi kapkami deště)
