تحليل دورة الخلية

تحليل دورة الخلية من خلال قياس محتوى الحمض النووي هي طريقة تستخدم التدفق الخلوي لتمييز الخلايا في المراحل المختلفة من دورة حياة الخلايا. قبل عملية التحليل، يتم جعل الخلايا قابلة للنفاذ ويتم معالجتها بصبغة فلورية مضيئة والتي تقوم بصباغة الحمض النووي (دي ان ايه DNA)، ومن الامثلة على هذه الصبغات يوديد البوربيديوم (بي آي PI). كثافة الإضاءة في الخلايا المصبوغة تتناسب مع كمية الحمض النووي DNA التي تحتويه طرديا، محتوى الحمض النووي في الخلية يحدد المرحلة اللتي تمر بها الخلية (G0 ,G1, S, G2, M). تنقسم المراحل السابقة إلى جزأين الأول يشمل (G0, G1, S) والثاني يشمل (G2, M) ويتضاعف محتوى الحمض النووي (DNA)في مرحلة S..و يمثل محتوى الحمض النووي (DNA)غالبا على رسم بياني ليقدم معلومات من خلال الترددات التي رسمت لكل مرحلة من مراحل دورة الخلية.

بعض الترددات غير الطبيعية يمكن ان تظهر في حال حصل تلف للخلية مهما كان نوعه، مثلا التلف في الحمض النووي (DNA) يمكن ان يقاطع تقدم دورة الخلية عند مراحل معينة، مثل هذا التهديد على تقدم دورة الخلية يمكن ان يؤدي اما إلى اصلاح الحمض النووي (DNA)أو إلى موت الخلية، اصلاح الحمض النووي (DNA)يمكن ان يؤدي إلى تحول الخلية الطبيعية إلى خلية سرطانية، اما موت الخلية فيحصل غالبا من خلال ما يسمى بالاستماتة أو موت الخلية المبرمج (طراز مورفولوجي لموت الخلايا المفردة المتميز بانكماش الخلية وتكثف الكروماتين وتشكل فقاعات هيولية ثم تتجزأ الخلية إلى شدف مرتبطة بالغشاء، ثم تبتلعها البلاعم حتى تختفي).المشاكل التي تواجه الخلية في مراحل (G0 و G1)غالبا ما تكون بسبب قلة المواد  الغذائية (مثل الحرمان من الامصال). بدا التعبير عن (تحليل دورة حياة الخلية) في عام 1969 في مختبرات لوس امالوس العلمية من قبل مجموعة من جامعة كاليفورنبا مستخدمين طريقة صبغة فيولجين، أول ببروتوكول لاستخدام صبغة يوديد البوربيديوم في تحليل دورة الخلية كان عام 1975 من خلال اوتار كريشان من كلية هارفرد الطبية وما زالت هذه الطريقة مستخدمة حتى وقتنا هذا.

تحليل دورة الخلية متعدد الوسائط يشمل، بالإضافة إلى قياس محتوى الحمض النووي، خصائص أخرى متعلقة بدورة الخلية، مثل القياس المتزامن لمحتوى الحمض النووي (DNA) والحمض الريبي النووي (RNA), أو قياس قابلية الحمض النووي (DNA) للتحطم عند رقم هيدروجيني (PH)منخفض من خلال استخدام صبغة الاكريدين البرتقالية، فتحدد مكونات مرحلة (G1Q, G1A, G1B) وتجعل من الممكن التمييز بين الخلايا في مرحلتي Sو Mو الخلايا المنقسمة. الخلايا في مرحلة (G1Q) تكون خاملة وموجودة بشكل مؤقت في دورة الخلية ويمكن ملاحظتها أيضا في (G0), الخلايا في مرحلة G1A تكون في طور النمو، اما في مرحلة G1B فتكون عبارة عن الخلايا تماما قبل دخولها مرحلة S ويكون نموها (سواء بكمية الحمض النووي الريبي RNA أو البروتين أو حجمها) مشابه للخلايا التي تبدا عملية تضاعف الحمض النووي. يمكن اكتشاف مكونات مشابهة في دورة الخلية من خلال التحليل متعدد الوسائط الذي يشمل قياس التعبير الذي يحدثه السايكلين دي 1 (CYCLIN D1) والسايكلين أي (CYCLIN E) والسايكلين ايه (CYCLIN A) والسايكلين بي 1 (CYCLIN B1). القياس المتزامن لمكونات الحمض النووي ووجود المركب الاولي 5-بروميد-2-دي اوكسي يوريدين من خلال التدفق الخلوي يعتبر  طريقة مفيدة بشكل خاص والتي يتم استخدامها بشكل واسع مؤخرا في تحليل الخلية في المختبر أو بالجسم الحي. مع ذلك تحليل وجود 5-ايثينيل-2-دي اوكسي ريودين أصبح الآن الطريقة المفضلة لتحديد وجود الخلايا المضاعفة للحمض النووي في مرحلة S.

خطوات عملية تحليل دورة الخلية

في حالة تم الصببغ باستخدام صبغة غير هوشست33342 (Hoechst 33342) فيجب اولا جعل الغشاء البلازمي للخلايا قابل للنفاذ ويتم ذلك من خلال وضعها في محلول يحافظ على درجة الرقم الهيدروجيني ويحتوي على منظف مخفف مثل تريتون اكس 100 (TRITON-X100)أو ان بي 40 (NP 40), أو من خلال تثبيت الخلايا في الايثانول، اغلب الصبغات باستثناء هوشست333422 (Hoechst 33342)غير قابلة  للنفاذ من خلال الغشاء البلازمي بالتالي تعتبر الخطوة السابقة ضرورية للنجاح الخطوة التي تليها، وهي صبغ الخلايا.

قبل أو خلال عملية الصبغ يتم معالجة الخلية بمحطمات للحمض النووي الريبي (RNase) للتخلص منه لان الصبغات ستصبغه كما ستصبغ الحمض النووي وبالتالي ستؤثر على النتيجة، الا في حالة استخدام صبغة الاكريدين البرتقالية لانها ستعطي الحمض النووي الريبي (RNA) اضاءة حمراء والحمض النووي (DNA) اضاءة خضراء، وفي حالة تم ازالة الحمض النووي الريبي (RNA) وتحطمت بعض اجزاء الحمض النووي (DNA) فانه سيصبغ الحمض النووي ثنائي الشريط (الغير محطم) بصبغة مختلفة عن الحمض النووي احادي الشريط (المحطم).و لان الخلايا تميل إلى الالتصاق ببعضها البعض يجب التخلص من الخلايا المتجمعة واستثناءها من عملية التحليل، لان الخلايا من مرحلة G0 و G1 لهما نفس كمية الحمض النووي والتي ستكون مجتمعة مساوية لكمية الحمض النووي الموجودة في خلية من مرحلة S أو M باتالي تعطي قراءة خاطئة.

اختبار نيوكليتي

اختبار نيوكليتي (Nicoletty Assay), والذي سمي باسم مخترعه الإيطالي الفيزيائي الدو نيوكليتي (Ildo Nicoletty), هو صورة معدلة عن عملية تحليل دورة حياة الخلية، والذي يقيس عدد الخلايا المستميتة (في عملية الموت المبرمج أو الاستماتة) ويتم ذلك من خلال قياس ما يسمى ب (خلايا G0/G1 الثانوية) والتي تحتوي على كمية اقل من الكروموسومات التي من المفترض تواجدها داخل الخلية في مرحلتي G0 و G1 (يجب ان تكون الكروموسومات في هذه المراحل مضاعفة 2N), مثل هذه الخلايا يمكن ان تنتج من خلال تحطيم الحمض النووي (DNA) بواسطة محطمات الحمض النووي (DNase) خلال عملية الاستماتة بالتالي تكون نواة الخلية تحتوي على اقل من الكمية المفترض تواجدها من الكوروموسومات، مما سسيؤدي إلى حدوث قفزة في الرسم البياني الخاص بالخلايا المصبوغة المضيئة بالتالي يحدد عدد الخلايا المستميتة. تم تطوير هذه الطريقة من خلال نيكوليتي ومساعديه في كلية الطب بجامعة بيروجيا. من الجدير بالذكر ان الجزيئات التي يتم قياسها من ضمن القفزة التي سبق ذكرها والتي تحتوي على اقل من 5% من كمية الحمض النووي المفروض تواجدها في خلايا G1 و G0 الثانوية تعتبر اجسام مسستميتة وليست خلايا مستميتة.

مراجع

  1. Van Dilla MA, Trujillo TT, Mullaney PF, Coulter JR (14 March 1969). "Cell Microfluorometry: A Method for Rapid Fluorescence Measurement". Science. 163 (3872): 1213–1214. doi:10.1126/science.163.3872.1213. PMID 5812751
  2. Krishan A. (July 1975). "Rapid flow cytofluorometric analysis of mammalian cell cycle by propidium iodide staining". The Journal of Cell Biology. 66 (1): 188–193. doi:10.1083/jcb.66.1.188. PMC 2109516. PMID 49354.
  3. Darzynkiewicz Z, Traganos F, Melamed MR. (1980) New cell cycle compartments identified by multiparameter flow cytometry. Cytometry 1:98-108. PMID 6161370
  4. Darzynkiewicz Z, Gong JP, Juan G, Ardelt B, Traganos, F. (1996) Cytometry of cyclin proteins. Cytometry 25:1-13, PMID 8875049 doi:10.1002/(SICI)1097-0320(19960901)25:1<1::AID-CYTO1>3.0.CO;2-N
  5. Gray JW, Dolbeare F, Pallavicini MG, Beisker W, Waldman F. (1986) Cell cycle analysis using flow cytometry. Int J Radiat Biol Relat Stud Phys Chem Med. Feb;49(2):237-55. PMID 3510993.
  6. Buck SB, Bradford J, Gee KR, Agnew BJ, Clarke ST, Salic A. (2008) Detection of S-phase cell cycle progression using 5-ethynyl-2'-deoxyuridine incorporation with click chemistry, an alternative to using 5-bromo-2'-deoxyuridine antibodies. Biotechniques. Jun;44(7):927-9. doi: 10.2144/000112812. PMID 18533904
  7. Vindeløv LL, Christensen IJ, Nissen NI (March 1983). "A detergent-trypsin method for the preparation of nuclei for flow cytometric DNA analysis". Cytometry. 3 (5): 323–327. doi:10.1002/cyto.990030503. PMID 6188586.
  8. Sharpless T, Traganos F, Darzynkiewicz Z, Melamed MR. (1975) Flow cytofluorimetry: discrimination between single cells and cell aggregates by direct size measurements. Acta Cytol. 19(6):577-81. PMID 1108568
  9. Wersto RP, Chrest FJ, Leary JF, Morris C, Stetler-Stevenson MA, Gabrielson E (15 October 2001). "Doublet discrimination in DNA cell-cycle analysis". Cytometry. 46 (5): 296–306. doi:10.1002/cyto.1171. PMID 11746105.
  10. Nicoletti I, Migliorati G, Pagliacci MC, Grignani F, Riccardi C (3 June 1991). "A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry". Journal of Immunological Methods. 139 (2): 271–279. doi:10.1016/0022-1759(91)90198-O. PMID 1710634.
  11. Riccardi C, Nicoletti I (9 November 2006). "Analysis of apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry". Nature Protocols. 1 (3): 1458–1461. doi:10.1038/nprot.2006.238. PMID 17406435
  12. Darzynkiewicz Z, Bedner E, Traganos F. (2001) Difficulties and pitfalls in analysis of apoptosis. Methods Cell Biol 63:527-559, PMID 11060857

Read other articles:

Rita Angus

Rita Angus Información personalNacimiento 12 de marzo de 1908 Hastings (Nueva Zelanda) Fallecimiento 25 de enero de 1970 (61 años)Wellington (Nueva Zelanda) Causa de muerte Cáncer de ovario Nacionalidad NeozelandesaEducaciónEducada en Chelsea College of Art and DesignIlam School of Fine ArtsPalmerston North Girls' High School Información profesionalOcupación Pintora, grabadora y artista Área Pintura al óleo Género Retrato Sitio web www.ritaangus.com [editar datos en Wikidata...

 

 

Albertsried

Albertsried Markt Schwarzach Koordinaten: 48° 54′ N, 12° 50′ O48.9024312.8382381Koordinaten: 48° 54′ 9″ N, 12° 50′ 18″ O Höhe: 381 m ü. NHN Einwohner: 103 (25. Mai 1987)[1] Eingemeindung: 1. Januar 1971 Gemarkung Albertsried Koordinaten: 48° 54′ N, 12° 50′ O48.9024312.8382 Fläche: 13,21 km² Einwohner: 455 (25. Mai 1987)[1] Bevölkerungsdi...

 

 

Christofer Drew

American musician Some of this article's listed sources may not be reliable. Please help this article by looking for better, more reliable sources. Unreliable citations may be challenged or deleted. (October 2014) (Learn how and when to remove this template message) Christofer DrewIngle during the Time Travel Tour in 2011Background informationBirth nameChristopher Drew IngleBorn (1991-02-11) February 11, 1991 (age 32)Oceanside, California, U.S.Genres Indie pop indie rock alternative rock...

Microsoft Access

Microsoft AccessPengembangMicrosoft CorporationRilis perdana1.0 / November 1992; 31 tahun lalu (1992-November)Rilis stabil2010 (14.0) / 28 April 2010; 13 tahun lalu (2010-04-28) Sistem operasiMicrosoft WindowsJenisDBMSLisensiProprietari perangkat lunak komersialSitus weboffice.microsoft.com/access Microsoft Access (atau Microsoft Office Access) adalah sebuah program aplikasi basis data komputer relasional yang ditujukan untuk kalangan rumahan dan perusahaan kecil hingga menengah. Ap...

 

 

Ignacio Alcocer

Mexican politician In this Spanish name, the first or paternal surname is Alcocer and the second or maternal family name is Rodríguez. This article does not cite any sources. Please help improve this article by adding citations to reliable sources. Unsourced material may be challenged and removed.Find sources: Ignacio Alcocer – news · newspapers · books · scholar · JSTOR (October 2023) (Learn how and when to remove this template message) Ignac...

 

 

Claudia Kemfert

Claudia Kemfert (2022) Claudia Kemfert (* 17. Dezember 1968 in Delmenhorst) ist eine deutsche Wirtschaftswissenschaftlerin. Sie ist Leiterin der Abteilung Energie, Verkehr und Umwelt am Deutschen Institut für Wirtschaftsforschung (DIW) sowie Professorin an der Leuphana Universität Lüneburg. Inhaltsverzeichnis 1 Leben 2 Ämter 3 Forschung 4 Positionen 5 Politik und Medien 6 Kontroversen 7 Auszeichnungen 8 Publikationen (Auswahl) 8.1 Sachbücher 8.2 Wissenschaftliche Veröffentlichungen 9 Ru...

Sky City 1000

Proposed skyscraper in Japan For other uses, see Sky City (disambiguation). Sky City 1000スカイシティー1000Proposed Rendering of the megatall Sky City 1000General informationStatusNever builtTypeHotel, office, residentialLocationTokyo, JapanHeightRoof1,000 m (3,300 ft)Technical detailsFloor count196[1]Floor area8 km2Design and constructionArchitect(s)Takenaka Corporation Sky City 1000 is a proposed skyscraper for the Tokyo metropolitan area. It was announced in 1989 a...

 

 

Kohlenstoffmonoxidintoxikation

Klassifikation nach ICD-10 T58 Toxische Wirkung von Kohlenmonoxid ICD-10 online (WHO-Version 2019) U-Rohr-Manometer zur Überwachung des Überdrucks einer Atemluftzufuhr Die Kohlenstoffmonoxidintoxikation oder Kohlenstoffmonoxidvergiftung (auch Kohlenmonoxidvergiftung, Kohlenmonoxidintoxikation, CO-Vergiftung, CO-Intoxikation und Kohlenoxydvergiftung) beschreibt eine Erkrankung, welche durch die Einwirkung bzw. Einatmung des gasförmigen Giftes Kohlenstoffmonoxid (CO) auf Menschen verursacht ...

 

 

Princess María de los Dolores of Bourbon-Two Sicilies

This article has multiple issues. Please help improve it or discuss these issues on the talk page. (Learn how and when to remove these template messages) This article does not cite any sources. Please help improve this article by adding citations to reliable sources. Unsourced material may be challenged and removed.Find sources: Princess María de los Dolores of Bourbon-Two Sicilies – news · newspapers · books · scholar · JSTOR (June 2020) (Learn how a...

Hermann Mutzenbecher

Dieser Artikel oder Abschnitt wurde wegen inhaltlicher Mängel auf der Qualitätssicherungsseite der Redaktion Geschichte eingetragen (dort auch Hinweise zur Abarbeitung dieses Wartungsbausteins). Dies geschieht, um die Qualität der Artikel im Themengebiet Geschichte auf ein akzeptables Niveau zu bringen. Dabei werden Artikel gelöscht, die nicht signifikant verbessert werden können. Bitte hilf mit, die Mängel dieses Artikels zu beseitigen, und beteilige dich bitte an der Diskussion! Herma...

 

 

Bristow Muldoon

Bristow Muldoon Bristow Muldoons Stimme (englisch) Bristow Muldoon (* 19. März 1964 in Glasgow) ist ein schottischer Politiker und Mitglied der Labour Party.[1] Bei den Schottischen Parlamentswahlen 1999[2] und 2003[3] gewann Muldoon das Direktmandat in seinem Wahlkreis Livingston und zog in das Schottische Parlament ein. Bei den Parlamentswahlen 2007 unterlag er seiner Kontrahentin Angela Constance von der Scottish National Party (SNP).[4] Zuvor war Muldoon g...

 

 

Allotropy

Property of some chemical elements to exist in two or more different forms Not to be confused with Allotrophy. Diamond and graphite are two allotropes of carbon: pure forms of the same element that differ in crystalline structure. Allotropy or allotropism (from Ancient Greek ἄλλος (allos) 'other', and τρόπος (tropos) 'manner, form') is the property of some chemical elements to exist in two or more different forms, in the same physical state, known as al...

Batak cuisine

Cuisine of the Batak people of Indonesia Saksang and panggang, the typical Batak dishes in Lapo (Batak restaurant). This article is part of the series onIndonesian cuisineMasakan Indonesia National dishes Gado-gado Nasi goreng Rendang Satay Soto Tumpeng Regional and cultural cuisines Acehnese Arab Balinese Banjarese Batak Betawi Chinese Gorontalese Indian Indo Javanese Madurese Makassarese Malay Minahasan Minangkabau Palembangese Peranakan Sundanese Ingredients Bumbu Condiments Peanut sauce S...

 

 

UNICEF Philippines

Country office of the United Nations Children’s Fund This article has multiple issues. Please help improve it or discuss these issues on the talk page. (Learn how and when to remove these template messages) This article needs additional citations for verification. Please help improve this article by adding citations to reliable sources. Unsourced material may be challenged and removed.Find sources: UNICEF Philippines – news · newspapers · books · scho...

 

 

Raiders of the Lost Ark (video game)

1982 action-adventure game created for the Atari 2600 1982 video gameRaiders of the Lost ArkDeveloper(s)Atari, Inc.Publisher(s)Atari, Inc.Designer(s)Howard Scott WarshawPlatform(s)Atari 2600ReleaseNovember 1982Genre(s)Action-adventure[1]Mode(s)Single-player Raiders of the Lost Ark is an action-adventure game for the Atari 2600 released in 1982, based on the 1981 film of the same name. The game was designed by Howard Scott Warshaw. Gameplay The player controls Indiana Jones as he searc...

Eldorado Amusement Park

Defunct amusement park in New Jersey Eldorado Amusement Park was a 25-acre (10.12 ha) amusement park that opened in 1891 in the Highwood Park section of Weehawken, New Jersey.[1][2] It operated as an amusement grounds through 1894,[3] after which time the main building, the Casino, was used to host boxing matches and other athletic events and vaudeville performances.[4][5] A massive fire in the early morning of November 4, 1898, destroyed the building.&...

 

 

Star Lane DLR station

Docklands Light Railway station Star Lane Eastern entranceStar LaneLocation of Star Lane in Greater LondonLocationCanning TownLocal authorityLondon Borough of NewhamManaged byDocklands Light RailwayNumber of platforms2AccessibleYesFare zone2 and 3DLR annual boardings and alightings2018 1.486 million[1]2019 1.504 million[2]2020 1.136 million[3]2021 0.971 million[4]2022 1.470 million[5]Railway companiesOriginal companyTransport for LondonKey dates31 Augus...

 

 

Dundee (UK Parliament constituency)

Parliamentary constituency in the United Kingdom, 1868–1950 DundeeFormer Burgh constituencyfor the House of CommonsMajor settlementsDundee1832–1950Seats1832–1868: One1868–1950: TwoCreated fromForfarshire[1]Replaced byDundee East Dundee West Dundee was a constituency of the House of Commons of the Parliament of the United Kingdom from 1832 to 1950, when it was split into Dundee East and Dundee West. From 1832 to 1868 it elected one Member of Parliament (MP) using the first-past...

Patrician (ancient Rome)

Hereditary nobility of ancient Rome Romulus and his brother, Remus, with the she-wolf. Romulus is credited with creating the patrician class. The patricians (from Latin: patricius) were originally a group of ruling class families in ancient Rome. The distinction was highly significant in the Roman Kingdom and the early Republic, but its relevance waned after the Conflict of the Orders (494 BC to 287 BC). By the time of the late Republic and Empire, membership in the patriciate was of only nom...

 

 

陶大偉

本條目有隱藏内容，或許有礙讀者閱覽。請協助改善條目，以符合维基百科标准。 (2015年9月12日)一般應該僅由特定標準化模板提供摺疊資料表格，勿因故事劇情或項目混雜而隱藏；內容應該考慮其他方式呈現。重複記載、過度細節與無助了解主題的堆砌內容等需要考慮除去。 陶大偉男艺人本名陶原英文名David Tao昵称陶叔叔别名陶鴻翔国籍 中華民國 美國出生(1942-09-28)...

 

 

Strategi Solo vs Squad di Free Fire: Cara Menang Mudah!